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這是一個關(guān)于博士畢業(yè)論文答辯ppt,主要介紹了課題背景、檢測設(shè)計思想、交流阻抗檢測表面雜交、鑲嵌型染料檢測表面雜交等內(nèi)容。本實驗中成功的將DNA分子接在了硅電極表面,并可以進行雜交反應(yīng)和解鏈反應(yīng)。實驗所采用的利用阻抗對DNA修飾表面的雜交過程檢測及實時檢測的靈敏度較高,并且時間響應(yīng)很快。合理的探針分子設(shè)計與電勢控制結(jié)合,可以實現(xiàn)對單個堿基錯配序列的特異性識別。采用無標記方法檢測,利用PicoGreen與雙鏈結(jié)合產(chǎn)生的熒光對DNA片斷修飾電極的雜交過程進行監(jiān)控,降低成本,操作簡便。第一次獲得了DNA修飾電極的雙鏈解鏈電位曲線。此曲線可以觀察到“完整”雙鏈的解鏈過程,從而避免了文獻中在靜態(tài)電位下測量的偶然實驗結(jié)果。同時可以提供詳細的動力學信息。 定義了雙鏈解鏈電位曲線的“半高電位”作為特異性識別的判據(jù)。這一判據(jù)的引入可以避免實驗誤差所帶來的假陽性和假陰性結(jié)果,使判斷更加可靠、重復。 電位掃描法的引入,可以不必探索在芯片點陣上每點的最佳測量條件,直接進行高度平行化的成像技術(shù)檢測,滿足基因芯片高通量檢測的需要,歡迎點擊下載博士畢業(yè)論文答辯ppt哦。
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北京大學化學學院博士學位論文答辯
答辯人: 魏 芳
指導老師:趙新生
2003年6月6日
簡 介
課題背景
檢測設(shè)計思想
交流阻抗檢測表面雜交
鑲嵌型染料檢測表面雜交
致謝
一、課 題 背 景
基因芯片檢測原理
堿基互補配對雜交原理
課 題 背 景
目前基因芯片的檢測方法
有標記: 熒光、同位素標記、酶標法
無標記: 交流阻抗、石英晶體微天平、
表面等離子體共振、質(zhì)譜法
目前基因芯片的不足
成本、特異性、全局優(yōu)化
單個堿基不同的寡聚核酸序列的識別(SNP)
二、檢測設(shè)計思想
Hairpin design + Potential control
設(shè) 計 思 想
I----發(fā)卡型分子雜交檢測原理
II----對修飾表面雜交過程的控制
改變?nèi)芤旱臐舛、pH、離子強度進行控制
利用溫度變化進行控制
利用外加電場進行控制
II-----電場控制下的表面雜交過程
電場對DNA的富集作用
電場對雙鏈在電極表面排列的影響
電場對雜交動力學的控制
檢測基底的制備路線-1
檢測基底的制備路線-2
檢 測 方 法
交流阻抗識別PM/SM
鑲嵌型染料識別PM/SM
三、交流阻抗雜交檢測
重復性實驗檢測
探針分子設(shè)計
探針分子設(shè)計
探針分子設(shè)計
DNA修飾電極的Mott-Schottky圖
雜交反應(yīng)的實時檢測
電 位 控 制
電位控制+發(fā)卡型分子設(shè)計=特異識別
第三部分 總 結(jié)
本實驗中成功的將DNA分子接在了硅電極表面,并可以進行雜交反應(yīng)和解鏈反應(yīng)。
實驗所采用的利用阻抗對DNA修飾表面的雜交過程檢測及實時檢測的靈敏度較高,并且時間響應(yīng)很快。
合理的探針分子設(shè)計與電勢控制結(jié)合,可以實現(xiàn)對單個堿基錯配序列的特異性識別。
四、鑲嵌式染料特異性識別
鑲嵌式染料的檢測原理
鑲嵌式染料的檢測原理
PicoGreen-結(jié)構(gòu)
PicoGreen對不同DNA鏈的識別
實 驗 路 線
探針分子設(shè)計
實 驗 裝 置
電位控制下的特異性識別
電位控制下的特異性識別
電位控制下的特異性識別
不同掃描速度的識別能力
不同掃描速度的識別能力
展 望
雙鏈解鏈反應(yīng)機理
利用解鏈電位曲線計算現(xiàn)場雜交時的堿基能量差值
如何更好的控制雙鏈的解鏈
小 結(jié)
采用無標記方法檢測, 利用PicoGreen與雙鏈結(jié)合產(chǎn)生的熒光對DNA片斷修飾電極的雜交過程進行監(jiān)控,降低成本,操作簡便。
第一次獲得了DNA修飾電極的雙鏈解鏈電位曲線。此曲線可以觀察到“完整”雙鏈的解鏈過程,從而避免了文獻中在靜態(tài)電位下測量的偶然實驗結(jié)果。同時可以提供詳細的動力學信息。
定義了雙鏈解鏈電位曲線的“半高電位”作為特異性識別的判據(jù)。這一判據(jù)的引入可以避免實驗誤差所帶來的假陽性和假陰性結(jié)果,使判斷更加可靠、重復。
電位掃描法的引入,可以不必探索在芯片點陣上每點的最佳測量條件,直接進行高度平行化的成像技術(shù)檢測,滿足基因芯片高通量檢測的需要。
在讀期間發(fā)表論文情況
Fang Wei, Xin Sheng Zhao
THIN SOLID FILMS 408 (1-2): 286-290 APR 3 2002
Fang Wei, Bin Sun, Yuan Guo, Xin Sheng Zhao
BIOSENSORS & BIOELECTRONICS 18 (9): 1157-1163, 2003
Fang Wei, Bin Sun, Wei Liao, Jianhua Ouyang, Xin Sheng Zhao
BIOSENSORS & BIOELECTRONICS 18 (9): 1149-1155 , 2003
趙新生,魏芳,孫豳
發(fā)卡形探針基因芯片及其制備方法和檢測方法 國家發(fā)明專利號 CN1373228
Conghua Lu, Nianzu Wu, Fang Wei, et al. ADVANCED FUNCTIONAL MATERIALS, In press, 2003
Cao TB, Fang Wei, Yang YL, et al. LANGMUIR 18 (13): 5186-5189 JUN 25 2002
Cao TB, Fang Wei, Huang L, et al. NEW J CHEM 26 (3): 269-271 MAR 2002
Huang L, Hou XR, He YK, Zheng XL, Fang Wei, Zhao XS, Cao WX
CHINESE J POLYM SCI 20 (3): 197-203 MAY 2002
Huang L, Fan S, Fang Wei, Xin-sheng Zhao, Jin-xin Xiao and Bu-yao Zhu
CHINESE J POLYM SCI 20 (5): 397-400 MAY 2002
Huang L, Huang F, He YK, Fang Wei, Zhao XS, Cao WX
ACTA POLYM SIN (2): 192-197 APR 2002
張黎征, 魏芳, 趙新生 ACTA PHYS-CHIM SIN 16 (4): 370-373 APR 2000
致 謝
指導教師: 趙新生 教授
楊華銓 教授
曹維孝 教授
郭 源 教授
本組成員:
歐陽賤華,廖瑋,關(guān)英華,翟林,陳旭東,陳春來,徐佳
于安池,羅國斌,柳汀汀,吳瑞閣,應(yīng)麗貞,孫豳,
洪蓮,張黎征,李密,郭銳,王勝龍,屈軍艷,李巍
鮑海凌,趙臨,林穎,武巍,高婷娟
合作成員:
曹廷炳,魯叢華
博士畢業(yè)論文答辯ppt課件:這是一個關(guān)于博士畢業(yè)論文答辯ppt課件,主要介紹了本文選題的依據(jù)、研究重點、研究目的意義和方法、本文主要創(chuàng)新點、CMS模型研究的創(chuàng)新意義等內(nèi)容。本研究采取對比研究法、統(tǒng)計分析法、德爾菲專家調(diào)查法、實地訪談法等。具體如下:綜合利用多學科理論,把國際經(jīng)濟學、產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟學、管理學、博弈論、國際貿(mào)易理論以及統(tǒng)計學等多領(lǐng)域的理論有機結(jié)合起來。綜合研究與重點研究相結(jié)合,在綜合研究的基礎(chǔ)上,選擇農(nóng)業(yè)國際化的困境與障礙、機遇與風險以及農(nóng)產(chǎn)品國際競爭力等重點領(lǐng)域進行深入研究。在農(nóng)產(chǎn)品國際競爭力的研究中,將采用國際上通行的顯性優(yōu)勢(RCA)法和等市場份額(CMS)模型。并采用國外先進的統(tǒng)計和分析軟件,作為本項目的數(shù)理分析支撐平臺,歡迎點擊下載博士畢業(yè)論文答辯ppt課件哦。
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